Pyrogallinen punainen proteiini virtsassa

Menetelmän periaate perustuu värillisen kompleksin liuoksen optisen tiheyden fotometriseen mittaukseen, joka muodostuu proteiinimolekyylien vuorovaikutuksesta pyrogallolipunaisen värikompleksin ja natriummolybdaattikompleksin (Pyrogallol Red-Molybdate -kompleksin) molekyylien kanssa happamassa väliaineessa. Liuoksen värin intensiteetti on verrannollinen tutkittavan materiaalin proteiinipitoisuuteen. Pesuaineiden läsnäolo reagenssissa antaa samanlaisen määritelmän proteiineista, joilla on erilainen luonne ja rakenne.

Reagenssit. 1) 1,5 mmol / l pyrogallolipunan (PGK) liuos: 60 mg PGK liuotettuna 100 ml: aan metanolia. Säilytä lämpötilassa 0–5 ° C; 2) 50 mmol / l sukkinaattipuskuriliuos, pH 2,5: 5,9 g meripihkahappoa (HOOC-CH2CH2-COOH); 0,14 g natriumoksalaattia (Na2C2O4) ja 0,5 g natriumbentsoaattia (C6H5COONa) liuotetaan 900 ml: aan tislattua vettä; 3) 10 mmol / l natriummolybdaattikiteitä sisältävän liuoksen (Na2MoO4 × 2H2O): 240 mg natriummolybdaattia liuotetaan 100 ml: aan tislattua vettä; 4) Työreagenssi: 900 ml: aan sukkinaattipuskuriliuosta lisätään 40 ml PHC-liuosta ja 4 ml natriummolybdaattiliuosta. Liuoksen pH säädetään arvoon 2,5 suolahapon (HCl) 0,1 mol / l liuoksella ja sen tilavuus säädetään 1 l: ksi. Tässä muodossa oleva reagenssi on käyttövalmis ja se on stabiili, kun sitä säilytetään pimeässä paikassa ja lämpötilassa 2–25 ° C 6 kuukauden ajan; 5) 0,5 g / l standardia albumiiniliuosta.

Määrittelyn kulku. 0,05 ml tutkittua virtsaa lisätään ensimmäiseen koeputkeen, 0,05 ml albumiinistandardiliuosta lisätään toiseen koeputkeen ja 0,05 ml tislattua vettä kolmanteen koeputkeen (kontrollinäyte), sitten 3 ml työreagenssia lisätään näihin koeputkiin. Putkien sisältö sekoitetaan ja 10 minuutin kuluttua näyte ja standardi valokuvataan kontrollinäytettä vastaan ​​aallonpituudella 596 nm kyvetissä, jonka optisen reitin pituus on 10 mm.

Analysoidun virtsanäytteen proteiinipitoisuuden laskeminen suoritetaan seuraavan kaavan mukaisesti:

jossa C on proteiinipitoisuus analysoidussa virtsanäytteessä, g / l;jne. ja aartikkeli- tutkitun virtsanäytteen ja standardin albumiiniliuoksen, g / l, häviäminen; 0,5 - standardin albumiiniliuoksen konsentraatio, g / l.

  • liuoksen väri (värikompleksi) on stabiili yhden tunnin ajan;
  • näytteen pitoisuuden ja liuoksen imeytymisen välinen suora suhteellinen suhde riippuu fotometrin tyypistä;
  • kun virtsan proteiinipitoisuus on yli 3 g / l, näyte laimennetaan isotonisella natriumkloridiliuoksella (9 g / l) ja määritys toistetaan. Laimennusaste otetaan huomioon määritettäessä proteiinipitoisuutta.

3. Proteiinin määrittäminen.

Menetelmän periaate perustuu proteiinin koaguloitumiseen virtsaan typpioksidin (tai 20-prosenttisen sulfosalisyylihapon) läsnä ollessa.

Työn edistyminen: 5 tippaa virtsaa lisää 1-2 tippaa typpi- (tai sulfosalisyyli) happoa. Proteiinin läsnä ollessa virtsassa esiintyy sameutta.

Pöytä. Virtsan patologisten komponenttien havaitseminen.

Huomautus: tutkitun virtsan glukoosin ja proteiinin läsnä ollessa määritetään niiden kvantitatiivinen sisältö.

Valkuaisaineen kvantitatiivinen määrittäminen virtsassa kolorimetrisen menetelmän avulla pyrogallolipunalla.

Menetelmän periaate: Kun proteiini on vuorovaikutuksessa pyrogallolipunaisen ja natriummolybdaatin kanssa, muodostuu värillinen kompleksi, värin intensiteetti, joka on verrannollinen näytteen proteiinipitoisuuteen.

reagenssit: Työreagenssi - pyrogallolipunainen liuos sukkinaattipuskurissa, kalibrointiproteiiniliuos, jonka pitoisuus on 0,50 g / l

Näytteet sekoitetaan, odota 10 minuuttia. huoneenlämpötilassa (18-25 ° C). Mittaa optinen tiheys (Dop) ja kalibrointinäyte (Dettä) kontrollinäytettä vastaan ​​λ = 598 (578-610) nm: ssä. Väritys on stabiili 1 tunti.

laskelma: proteiinin pitoisuus virtsassa (C) g / l lasketaan kaavalla:

Normaalit arvot: jopa 0,094 g / l (0,141 g / vrk)

Glukoosin kvantitatiivinen määrittäminen virtsassa glukoosioksidaasimenetelmällä.

Menetelmän periaate: Kun D-glukoosi hapetetaan ilmakehän hapella glukoosioksidaasin vaikutuksesta, muodostuu ekvimolaarinen määrä vetyperoksidia. Peroksidaasin vaikutuksesta vetyperoksidi hapettaa kromogeeniset substraatit (fenolin ja 4-aminoantipiriinin seos - 4ААP) muodostamalla värillinen tuote. Värin intensiteetti on verrannollinen glukoosipitoisuuteen.

2 N2oi2 + fenoli + 4ААП värillinen yhdiste + 4Н2oi

Työn edistyminen: 1 ml työliuosta ja 0,5 ml fosfaattipuskuria lisätään kahteen putkeen. 0,02 ml virtsaa lisätään ensimmäiseen putkeen ja 0,02 ml kalibraattoria lisätään toiseen (kalibrointi, standardi glukoosiliuos, 10 mmol / l). Näytteet sekoitetaan, inkuboidaan 15 minuuttia 37 ° C: n lämpötilassa termostaatissa ja optinen tiheys mitataan kokeellisella (Dop) ja kalibrointi (Dettä) näytteet työreagenssia vastaan ​​aallonpituudella 500-546 nm.

Glukoosipitoisuus päivittäisessä virtsassa määritetään mmol / vrk kertomalla saatu määrä virtsan keräyksellä päivässä.

Huom. Kun sokeripitoisuus virtsassa on yli 1%, se on laimennettava.

Tällä hetkellä biokemialliset laboratoriot käyttävät yhtenäistä ekspressiomenetelmää virtsan analysoimiseksi glukoosille käyttäen reaktiivista glukoosikokeen glukoositestiä tai käyttämällä yhdistettyjä testiliuskoja PH: lle, proteiinille, glukoosille, ketonikappaleille ja verelle. Testiliuskat, upotetaan astiaan virtsan kanssa 1 sekunnin ajan. ja vertaa asteikon väriä.

Hoidamme maksan

Hoito, oireet, lääkkeet

Pyrogallinen punainen proteiini virtsassa

26.02.2009

Kurilyak O.A., Ph.D.

Tavallisesti proteiini erittyy virtsaan suhteellisen pienessä määrässä, yleensä enintään 100–150 mg / vrk.

Päivittäinen diureesi terveellä henkilöllä on 1000-1500 ml / vrk; näin ollen proteiinipitoisuus fysiologisissa olosuhteissa on 8–10 mg / dl (0,08–0,1 g / l).

Virtsan kokonaisproteiinia edustavat kolme pääfraktiota - albumiini, mukoproteiinit ja globuliinit.

Virtsan albumiini on seerumialbumiinin osa, joka on suodatettu glomerulioissa ja jota ei ole imeytynyt uudelleen munuaisputkiin; Normaali virtsan albumiinin erittyminen on alle 30 mg / vrk. Toinen merkittävä virtsan proteiinin lähde on munuaisputket, erityisesti tubulojen distaalinen osa. Nämä putket erittävät kaksi kolmasosaa virtsan proteiinin kokonaismäärästä; tästä määrästä noin 50% edustaa Tamm-Horsfall-glykoproteiinia, joka erittyy distaalisten tubulien epiteelillä ja jolla on tärkeä rooli virtsakivien muodostamisessa. Muita proteiineja on virtsassa pieninä määrinä ja ne ovat peräisin pienimolekyylipainoisista plasmaproteiineista, jotka suodatetaan munuaissuodattimen läpi, jotka eivät imeydy munuaisten tubuloihin, mikroglobuliinit munuaistubululin epiteelistä (RTE), samoin kuin eturauhas- ja emätinpoisto.

Proteinuria, toisin sanoen virtsan proteiinipitoisuuden kasvu, on yksi merkittävimmistä oireista, mikä heijastaa munuaisvaurioita. Useita muita tiloja voi kuitenkin seurata proteinuuria. Siksi proteiinia on kaksi pääryhmää: munuaisten (todellinen) ja ekstrarenaalinen (väärin) proteinuuria.

Munuaisten proteinuuriassa proteiini menee virtsaan suoraan verestä glomerulaarisen suodattimen läpäisevyyden lisääntymisen vuoksi. Munuaisproteiinia esiintyy usein glomerulonefriitissa, nefroosissa, pyelonefriitissä, nefroskleroosissa, munuaisten amyloidoosissa, eri nefropatian muodoissa, esimerkiksi raskaana olevien naisten nefropatiassa, kuumeisissa tiloissa, verenpaineessa jne. Proteinuria voi esiintyä myös terveillä ihmisillä vakavan fyysisen rasituksen, hypotermian ja psykologisen stressin jälkeen. Vastasyntyneillä fysiologinen proteinuuria havaitaan ensimmäisinä elinaikoina, ja kun lapsilla ja nuorilla esiintyy asteniaa, ortostaattinen proteinuuria (kehon pystyasennossa) on mahdollista yhdistettynä nopeaan kasvuun 7–18-vuotiaiden välillä.

Jos kyseessä on väärä (ekstrarenaalinen) proteinuuria, virtsan proteiinilähde on leukosyyttien, erytrosyyttien, virtsateiden uroteelin epiteelisolujen sekoitus. Näiden elementtien, erityisesti emäksisen virtsan aiheuttama, hajoaminen johtaa proteiinin tunkeutumiseen virtsaan, joka on jo läpäissyt munuaissuodattimen. Erityisen suuri väärän proteinuurian aste antaa veren virtsassa runsaalla hematurialla, se voi nousta 30 g / l ja enemmän. Sairaudet, joihin voi liittyä ekstrarenaalinen proteinuuria - virtsatulehdus, munuais tuberkuloosi, munuais- tai virtsateiden kasvaimet, kystiitti, pyeliitti, prostatiitti, uretriitti, vulvovaginiitti.

Kliininen luokittelu sisältää kevyen proteiiniarvon (alle 0,5 g / vrk), kohtalainen (0,5 - 4 g / vrk) tai vaikea (yli 4 g / vrk).

Useimmat munuaissairaudet, kuten akuutti glomerulonefriitti tai pyelonefriitti, osoittavat kohtalaisen proteinuuria, mutta nefroottista oireyhtymää sairastavat potilaat erittävät yleensä yli 4 g proteiinia päivittäin.

Useita menetelmiä käytetään proteiinin kvantitatiiviseen määritykseen, erityisesti yhdistettyyn Brandberg-Roberts-Stolnikov-menetelmään, biureettimenetelmään, sulfosalisyylihappomenetelmään, menetelmiin, joissa käytetään Coomassie-sinistä väriainetta, pyrogallolipunaa, jne.

Eri menetelmien käyttö proteiinin määrittämiseksi virtsassa on johtanut vakavaan sekaannukseen virtsan proteiinipitoisuuden normin tulkinnan tulkinnassa. Koska 2 menetelmää käytetään yleisimmin laboratorioissa - sulfosalisyylihappo ja pyrogallolipunainen väriaine, otamme huomioon niiden normien rajojen oikeellisuuden. Sulfosalisyylisen menetelmän näkökulmasta normaalissa virtsassa proteiinipitoisuus ei saa ylittää 0,03 g / l, ja pyrogallolin kannalta 0,1 g / l! Erot ovat kolminkertaiset.

Alhaiset arvot proteiinin normaalista pitoisuudesta virtsassa käytettäessä sulfosalisyyliä seuraavien seikkojen vuoksi:

  • kalibrointikäyrä perustuu albumiinin vesiliuokseen. Virtsan koostumus on hyvin erilainen kuin vedessä: pH, suola, pienimolekyyliset yhdisteet (kreatiniini, urea jne.). Tämän seurauksena Altshulerin, Rakovin ja Tkachevin mukaan virtsan proteiinin määritysvirhe voi olla 3 kertaa tai enemmän! eli oikeat määritystulokset voidaan saada vain niissä tapauksissa, joissa virtsan ominaispaino on hyvin pieni ja jonka koostumus ja pH lähestyvät vettä;
  • sulfosalisyyli- menetelmän korkeampi herkkyys albumiinille verrattuna muihin proteiineihin (tuolloin, kuten edellä mainittiin, albumiini normaaleissa virtsanäytteissä ei ole enempää kuin 30% virtsan kokonaisproteiinista);
  • jos virtsan pH siirtyy emäksiselle puolelle, sulfosalisyylihappo neutraloidaan, mikä aiheuttaa myös proteiinimäärityksen tulosten vähenemisen;
  • saostumien sedimentoitumisnopeus vaihtelee huomattavasti - alhaisilla proteiinikonsentraatioilla saostuminen hidastuu ja reaktion aikainen lopettaminen johtaa tuloksen aliarviointiin;
  • saostumisnopeus riippuu oleellisesti reaktioseoksen sekoittumisesta. Suurilla proteiinipitoisuuksilla putken voimakas ravistelu voi johtaa suurten hiutaleiden muodostumiseen ja niiden nopeaan saostumiseen.

Kaikki edellä mainitut menetelmän ominaisuudet johtavat virtsassa määritettyyn proteiinikonsentraation merkittävään aliarviointiin. Aliarvioinnin aste riippuu voimakkaasti tietyn virtsanäytteen koostumuksesta. Koska sulfosalisyylihapon menetelmä antaa aliarvioidun arvon proteiinipitoisuudelle, tämän menetelmän normaali raja on myös 0,03 g / l, noin kolme kertaa liian alhainen verrattuna kliinisissä laboratoriodiagnostiikoissa annetuissa vieraskirjoissa annettuihin tietoihin.

Suurin osa länsimaiden laboratorioista on luopunut sulfosalisyylihapon käytöstä proteiinin pitoisuuden määrittämiseksi virtsassa ja käyttävät aktiivisesti pyrogallolimenetelmää tähän tarkoitukseen. Pyrogallolimenetelmä proteiinipitoisuuden määrittämiseksi virtsassa ja muissa biologisissa nesteissä perustuu fotometriseen periaatteeseen mitata värillisen kompleksin optinen tiheys, joka muodostuu proteiinimolekyylien vuorovaikutuksesta pyrogallolipunaisen väriaineen ja natriummolybdaattikompleksimolekyylien kanssa (Pyrogallol Red-Molybdate -kompleksi).

Miksi pyrogallol-menetelmällä saadaan tarkempia tuloksia proteiinin pitoisuuden mittaamisesta virtsassa? Ensinnäkin johtuen virtsanäytteiden suuremmasta laimentumisesta reaktioseoksessa. Jos sulfosalisyyli- menetelmässä virtsanäytteen / reagenssin suhde on 1/3, niin pyrogallolimenetelmässä se voi olla alueella 1 / 12,5 - 1/60 tekniikan muunnoksesta riippuen, mikä vähentää merkittävästi virtsan koostumuksen vaikutusta mittaustulokseen. Toiseksi reaktio etenee sukkinaattipuskurissa, ts. Stabiilissa pH: ssa. Lopuksi, menetelmän hyvin periaatteena voidaan sanoa olevan "läpinäkyvämpi". Natriummolybdaatti ja pyrogallolipunainen väri muodostavat kompleksin proteiinimolekyylin kanssa. Tämä johtaa siihen, että vapaana olevat värimolekyylit, jotka eivät absorboi valoa 600 nm: n aallonpituudella yhdessä proteiinin kanssa, absorboivat valoa. Siten näemme merkitsevän kukin proteiinimolekyylin väriaineella ja sen seurauksena havaitsemme, että reaktioseoksen optisen tiheyden muutos aallonpituudella 600 nm korreloi selvästi proteiinin pitoisuuden kanssa virtsassa. Lisäksi, koska pyrogallolipunan affiniteetti eri proteiinifraktioihin on lähes sama, menetelmä sallii virtsan kokonaisproteiinin määrittämisen. Siksi virtsan proteiinipitoisuuden normaaliarvojen raja on 0,1 g / l (se on ilmoitettu kaikissa nykyaikaisissa länsimaisissa suuntaviivoissa kliinistä ja laboratoriotutkimusta varten, mukaan lukien N. Titsan toimittama kliinisen käsikirjan laboratoriotesteistä). Taulukossa 1 on esitetty pyrogallolin ja sulfosalisyylien menetelmien vertailuominaisuudet virtsan proteiinin määrittämiseksi.

Lopuksi haluaisin vielä kerran keskittyä siihen, että kun laboratorio lähtee sulfosalisyyli- menetelmästä virtsan proteiinin määrittämiseksi pyrogallolimenetelmään, normaaliarvojen raja nousee merkittävästi (0,03 g / l: sta 0,1 g / l!). Tämän laboratorion henkilökunnan tulisi varmasti ilmoittaa lääkärille, koska Tässä tilanteessa proteinuuria voidaan diagnosoida vain siinä tapauksessa, että virtsan proteiinipitoisuus ylittää 0,1 g / l.

Hoidamme maksan

Hoito, oireet, lääkkeet

Pyrogallolipunainen proteiinin määritys virtsassa

26.02.2009

Kurilyak O.A., Ph.D.

Tavallisesti proteiini erittyy virtsaan suhteellisen pienessä määrässä, yleensä enintään 100–150 mg / vrk.

Päivittäinen diureesi terveellä henkilöllä on 1000-1500 ml / vrk; näin ollen proteiinipitoisuus fysiologisissa olosuhteissa on 8–10 mg / dl (0,08–0,1 g / l).

Virtsan kokonaisproteiinia edustavat kolme pääfraktiota - albumiini, mukoproteiinit ja globuliinit.

Virtsan albumiini on seerumialbumiinin osa, joka on suodatettu glomerulioissa ja jota ei ole imeytynyt uudelleen munuaisputkiin; Normaali virtsan albumiinin erittyminen on alle 30 mg / vrk. Toinen merkittävä virtsan proteiinin lähde on munuaisputket, erityisesti tubulojen distaalinen osa. Nämä putket erittävät kaksi kolmasosaa virtsan proteiinin kokonaismäärästä; tästä määrästä noin 50% edustaa Tamm-Horsfall-glykoproteiinia, joka erittyy distaalisten tubulien epiteelillä ja jolla on tärkeä rooli virtsakivien muodostamisessa. Muita proteiineja on virtsassa pieninä määrinä ja ne ovat peräisin pienimolekyylipainoisista plasmaproteiineista, jotka suodatetaan munuaissuodattimen läpi, jotka eivät imeydy munuaisten tubuloihin, mikroglobuliinit munuaistubululin epiteelistä (RTE), samoin kuin eturauhas- ja emätinpoisto.

Proteinuria, toisin sanoen virtsan proteiinipitoisuuden kasvu, on yksi merkittävimmistä oireista, mikä heijastaa munuaisvaurioita. Useita muita tiloja voi kuitenkin seurata proteinuuria. Siksi proteiinia on kaksi pääryhmää: munuaisten (todellinen) ja ekstrarenaalinen (väärin) proteinuuria.

Munuaisten proteinuuriassa proteiini menee virtsaan suoraan verestä glomerulaarisen suodattimen läpäisevyyden lisääntymisen vuoksi. Munuaisproteiinia esiintyy usein glomerulonefriitissa, nefroosissa, pyelonefriitissä, nefroskleroosissa, munuaisten amyloidoosissa, eri nefropatian muodoissa, esimerkiksi raskaana olevien naisten nefropatiassa, kuumeisissa tiloissa, verenpaineessa jne. Proteinuria voi esiintyä myös terveillä ihmisillä vakavan fyysisen rasituksen, hypotermian ja psykologisen stressin jälkeen. Vastasyntyneillä fysiologinen proteinuuria havaitaan ensimmäisinä elinaikoina, ja kun lapsilla ja nuorilla esiintyy asteniaa, ortostaattinen proteinuuria (kehon pystyasennossa) on mahdollista yhdistettynä nopeaan kasvuun 7–18-vuotiaiden välillä.

Jos kyseessä on väärä (ekstrarenaalinen) proteinuuria, virtsan proteiinilähde on leukosyyttien, erytrosyyttien, virtsateiden uroteelin epiteelisolujen sekoitus. Näiden elementtien, erityisesti emäksisen virtsan aiheuttama, hajoaminen johtaa proteiinin tunkeutumiseen virtsaan, joka on jo läpäissyt munuaissuodattimen. Erityisen suuri väärän proteinuurian aste antaa veren virtsassa runsaalla hematurialla, se voi nousta 30 g / l ja enemmän. Sairaudet, joihin voi liittyä ekstrarenaalinen proteinuuria - virtsatulehdus, munuais tuberkuloosi, munuais- tai virtsateiden kasvaimet, kystiitti, pyeliitti, prostatiitti, uretriitti, vulvovaginiitti.

Kliininen luokittelu sisältää kevyen proteiiniarvon (alle 0,5 g / vrk), kohtalainen (0,5 - 4 g / vrk) tai vaikea (yli 4 g / vrk).

Useimmat munuaissairaudet, kuten akuutti glomerulonefriitti tai pyelonefriitti, osoittavat kohtalaisen proteinuuria, mutta nefroottista oireyhtymää sairastavat potilaat erittävät yleensä yli 4 g proteiinia päivittäin.

Useita menetelmiä käytetään proteiinin kvantitatiiviseen määritykseen, erityisesti yhdistettyyn Brandberg-Roberts-Stolnikov-menetelmään, biureettimenetelmään, sulfosalisyylihappomenetelmään, menetelmiin, joissa käytetään Coomassie-sinistä väriainetta, pyrogallolipunaa, jne.

Eri menetelmien käyttö proteiinin määrittämiseksi virtsassa on johtanut vakavaan sekaannukseen virtsan proteiinipitoisuuden normin tulkinnan tulkinnassa. Koska 2 menetelmää käytetään yleisimmin laboratorioissa - sulfosalisyylihappo ja pyrogallolipunainen väriaine, otamme huomioon niiden normien rajojen oikeellisuuden. Sulfosalisyylisen menetelmän näkökulmasta normaalissa virtsassa proteiinipitoisuus ei saa ylittää 0,03 g / l, ja pyrogallolin kannalta 0,1 g / l! Erot ovat kolminkertaiset.

Alhaiset arvot proteiinin normaalista pitoisuudesta virtsassa käytettäessä sulfosalisyyliä seuraavien seikkojen vuoksi:

  • kalibrointikäyrä perustuu albumiinin vesiliuokseen. Virtsan koostumus on hyvin erilainen kuin vedessä: pH, suola, pienimolekyyliset yhdisteet (kreatiniini, urea jne.). Tämän seurauksena Altshulerin, Rakovin ja Tkachevin mukaan virtsan proteiinin määritysvirhe voi olla 3 kertaa tai enemmän! eli oikeat määritystulokset voidaan saada vain niissä tapauksissa, joissa virtsan ominaispaino on hyvin pieni ja jonka koostumus ja pH lähestyvät vettä;
  • sulfosalisyyli- menetelmän korkeampi herkkyys albumiinille verrattuna muihin proteiineihin (tuolloin, kuten edellä mainittiin, albumiini normaaleissa virtsanäytteissä ei ole enempää kuin 30% virtsan kokonaisproteiinista);
  • jos virtsan pH siirtyy emäksiselle puolelle, sulfosalisyylihappo neutraloidaan, mikä aiheuttaa myös proteiinimäärityksen tulosten vähenemisen;
  • saostumien sedimentoitumisnopeus vaihtelee huomattavasti - alhaisilla proteiinikonsentraatioilla saostuminen hidastuu ja reaktion aikainen lopettaminen johtaa tuloksen aliarviointiin;
  • saostumisnopeus riippuu oleellisesti reaktioseoksen sekoittumisesta. Suurilla proteiinipitoisuuksilla putken voimakas ravistelu voi johtaa suurten hiutaleiden muodostumiseen ja niiden nopeaan saostumiseen.

Kaikki edellä mainitut menetelmän ominaisuudet johtavat virtsassa määritettyyn proteiinikonsentraation merkittävään aliarviointiin. Aliarvioinnin aste riippuu voimakkaasti tietyn virtsanäytteen koostumuksesta. Koska sulfosalisyylihapon menetelmä antaa aliarvioidun arvon proteiinipitoisuudelle, tämän menetelmän normaali raja on myös 0,03 g / l, noin kolme kertaa liian alhainen verrattuna kliinisissä laboratoriodiagnostiikoissa annetuissa vieraskirjoissa annettuihin tietoihin.

Suurin osa länsimaiden laboratorioista on luopunut sulfosalisyylihapon käytöstä proteiinin pitoisuuden määrittämiseksi virtsassa ja käyttävät aktiivisesti pyrogallolimenetelmää tähän tarkoitukseen. Pyrogallolimenetelmä proteiinipitoisuuden määrittämiseksi virtsassa ja muissa biologisissa nesteissä perustuu fotometriseen periaatteeseen mitata värillisen kompleksin optinen tiheys, joka muodostuu proteiinimolekyylien vuorovaikutuksesta pyrogallolipunaisen väriaineen ja natriummolybdaattikompleksimolekyylien kanssa (Pyrogallol Red-Molybdate -kompleksi).

Miksi pyrogallol-menetelmällä saadaan tarkempia tuloksia proteiinin pitoisuuden mittaamisesta virtsassa? Ensinnäkin johtuen virtsanäytteiden suuremmasta laimentumisesta reaktioseoksessa. Jos sulfosalisyyli- menetelmässä virtsanäytteen / reagenssin suhde on 1/3, niin pyrogallolimenetelmässä se voi olla alueella 1 / 12,5 - 1/60 tekniikan muunnoksesta riippuen, mikä vähentää merkittävästi virtsan koostumuksen vaikutusta mittaustulokseen. Toiseksi reaktio etenee sukkinaattipuskurissa, ts. Stabiilissa pH: ssa. Lopuksi, menetelmän hyvin periaatteena voidaan sanoa olevan "läpinäkyvämpi". Natriummolybdaatti ja pyrogallolipunainen väri muodostavat kompleksin proteiinimolekyylin kanssa. Tämä johtaa siihen, että vapaana olevat värimolekyylit, jotka eivät absorboi valoa 600 nm: n aallonpituudella yhdessä proteiinin kanssa, absorboivat valoa. Siten näemme merkitsevän kukin proteiinimolekyylin väriaineella ja sen seurauksena havaitsemme, että reaktioseoksen optisen tiheyden muutos aallonpituudella 600 nm korreloi selvästi proteiinin pitoisuuden kanssa virtsassa. Lisäksi, koska pyrogallolipunan affiniteetti eri proteiinifraktioihin on lähes sama, menetelmä sallii virtsan kokonaisproteiinin määrittämisen. Siksi virtsan proteiinipitoisuuden normaaliarvojen raja on 0,1 g / l (se on ilmoitettu kaikissa nykyaikaisissa länsimaisissa suuntaviivoissa kliinistä ja laboratoriotutkimusta varten, mukaan lukien N. Titsan toimittama kliinisen käsikirjan laboratoriotesteistä). Taulukossa 1 on esitetty pyrogallolin ja sulfosalisyylien menetelmien vertailuominaisuudet virtsan proteiinin määrittämiseksi.

Lopuksi haluaisin vielä kerran keskittyä siihen, että kun laboratorio lähtee sulfosalisyyli- menetelmästä virtsan proteiinin määrittämiseksi pyrogallolimenetelmään, normaaliarvojen raja nousee merkittävästi (0,03 g / l: sta 0,1 g / l!). Tämän laboratorion henkilökunnan tulisi varmasti ilmoittaa lääkärille, koska Tässä tilanteessa proteinuuria voidaan diagnosoida vain siinä tapauksessa, että virtsan proteiinipitoisuus ylittää 0,1 g / l.

Lääkäri Hepatiitti

maksan hoitoon

Normaali proteiini virtsan pyrogallolimenetelmässä

Terve ihminen tuottaa 1,0–1,5 litraa virtsaa päivässä. Se sisältää 8 - 10 mg / dl proteiinia fysiologisena ilmiönä. Valkuaisen päivittäinen saanti virtsassa 100-150 mg ei saisi aiheuttaa epäilyksiä. Globuliini, mukoproteiini ja albumiini muodostavat kokonaisproteiinin virtsassa. Suuri albumiinin ulosvirtaus osoittaa suodatusprosessin rikkomista munuaisissa ja sitä kutsutaan proteinuuriaksi tai albuminuriaksi.

Jokaiselle virtsan sisältämälle aineelle annetaan "terve" nopeus, ja jos proteiinin indeksi vaihtelee, tämä voi merkitä munuaisten patologiaa.

Virtsanalyysi sisältää joko ensimmäisen (aamun) annoksen tai ottaa päivittäisen näytteen. Jälkimmäinen on parempi arvioida proteinuurian tasoa, koska proteiinipitoisuudella on voimakkaita päivittäisiä vaihteluja. Virtsa kerätään päivän aikana yhteen säiliöön, mitataan kokonaistilavuus. Laboratoriossa, joka suorittaa virtsan proteiinianalyysin, tässä astiassa oleva standardinäyte (50 - 100 ml) on riittävä, jäljellä olevaa määrää ei tarvita. Lisätietoa suoritetaan Zimnitsky-testillä, joka osoittaa, ovatko virtsan indikaattorit päivässä normaalit.

Takaisin sisällysluetteloon

Virtsassa oleva proteiini on normaali aikuisessa, ei saa ylittää 0,033 g / l. Samalla päivittäinen määrä ei ole suurempi kuin 0,05 g / l. Raskaana oleville naisille proteiinin määrä päivittäisessä virtsassa on enemmän - 0,3 g / l. Ja aamulla virtsa on sama - 0,033 g / l. Proteiinin standardit eroavat virtsan yleisestä analyysistä ja lapsista: 0,036 g / l aamulla ja 0,06 g / l päivässä. Useimmiten laboratoriot suorittavat analyysin kahdella menetelmällä, jotka osoittavat, kuinka paljon proteiinifraktiota on virtsassa. Edellä mainitut normaaliarvot pätevät sulfosalisyylihapolla tehdyn analyysin osalta. Jos käytettiin pyrogallolipunaa, arvot ovat kolme kertaa erilaiset.

Takaisin sisällysluetteloon

Virtsan proteiinin syy voi olla patologisia prosesseja munuaisissa:

  • suodatus munuaisten glomeruloissa menee väärin;
  • imeytyminen proteiiniputkissa on heikentynyt;
  • Joillakin sairauksilla on voimakas kuormitus munuaisille - kun veressä oleva proteiini on kohonnut, munuaisilla ei yksinkertaisesti ole aikaa suodattaa sitä.

Jäljellä olevat syyt katsotaan ei-munuaisiksi. Näin kehittyy funktionaalinen albuminuria. Virtsan analyysissä esiintyvä proteiini esiintyy allergisissa reaktioissa, epilepsiassa, sydämen vajaatoiminnassa, leukemiassa, myrkytyksessä, myeloomissa, kemoterapiassa, systeemisissä sairauksissa. Useimmiten tällainen indikaattori potilasanalyyseissä on ensimmäinen hypertensiivisen sairauden kello.

Virtsan proteiinimäärän kasvu voi johtua ei-patologisista tekijöistä, minkä vuoksi tarvitaan lisäanalyysejä.

Kvantitatiiviset menetelmät proteiinin määrittämiseksi virtsassa aiheuttavat virheitä, joten on suositeltavaa suorittaa useita analyysejä ja käyttää sitten kaavaa oikean arvon laskemiseksi. Virtsan proteiinipitoisuus mitataan g / l tai mg / l. Nämä proteiinin indikaattorit mahdollistavat proteinuurian tason määrittämisen, syyn, arvioinnin ennusteen ja strategian määrittämisen.

Takaisin sisällysluetteloon

Kehon täydellistä toimintaa varten tarvitaan jatkuvaa vaihtoa veren ja kudosten välillä. On mahdollista vain, jos verisuonissa on tietty osmoottinen paine. Veriplasman proteiinit vain säilyttävät tällaisen paineen, kun matalamolekyyliset aineet kulkeutuvat helposti väliaineesta niiden suurella pitoisuudella alemmalla pitoisuudella olevaan väliaineeseen. Proteiinimolekyylien menetys johtaa veren vapautumiseen sängystä kudokseen, joka on täynnä voimakasta turvotusta. Tämä on kohtalaisen ja vaikean proteinuurin ilmentymä.

Albuminurian alkuvaiheet ovat oireettomia. Potilas kiinnittää huomiota vain taustalla olevan sairauden ilmentymiin, joka on virtsan proteiinin aiheuttaja.

Jäljennösproteiinia kutsutaan virtsan proteiinitason kasvuksi tiettyjen tuotteiden käytön vuoksi.

Virtsa analysoitavaksi kerätään puhtaaseen rasvattomaan astiaan. Ennen WC: n keräämistä näytetään perineum, sinun on pestävä saippualla ja vedellä. Naisia ​​suositellaan sulkemaan emätin puuvillan tai tamponin kanssa niin, että emättimen purkautuminen ei vaikuta tulokseen. Aikaisemmin on parempi olla juomasta alkoholia, kivennäisvettä, kahvia, mausteista, suolaista ja ruokaa, joka antaa virtsan värin (mustikat, punajuuret). Vahva fyysinen rasitus, pitkä kävely, stressi, kuume ja hikoilu, proteiinipitoisten elintarvikkeiden tai lääkkeiden liiallinen käyttö ennen virtsan antamista aiheuttavat proteiinin ulkonäköä täysin terveen ihmisen virtsan analyysissä. Tätä sallittua ilmiötä kutsutaan jäljitettäväksi proteinuriaksi.

Takaisin sisällysluetteloon

Munuaissairaus, joka johtaa proteiinihäviöön:

  • Amyloidoosi. Normaalit solut munuaisissa korvataan amyloideilla (proteiini-sakkaridikompleksi), mikä estää kehoa toimimasta normaalisti. Proteusivaiheessa amyloidit kerrostuvat munuaiskudoksiin, tuhoavat nefronin ja sen seurauksena munuaissuodattimen. Joten proteiini pääsee verestä virtsaan. Tämä vaihe voi kestää yli 10 vuotta.
  • Diabeettinen nefropatia. Hiilihydraattien ja lipidien epäasianmukaisesta aineenvaihdunnasta johtuen munuaisten verisuonet, glomerulukset ja tubulukset tuhoutuvat. Virtsan proteiini on ensimmäinen merkki diabeteksen ennustettavasta komplikaatiosta.
  • Tulehdusgeneesin sairaudet - nefriitti. Useimmiten vauriot vaikuttavat verisuonten, glomerulien ja pectoral-pelvis -järjestelmiin, mikä häiritsee suodatusjärjestelmän normaalia kulkua.
  • Glomerulonefriitti on useimmissa tapauksissa autoimmuuninen. Potilas valittaa virtsan määrän laskusta, alaselän kipusta ja paineen noususta. Glomerulonefriitin hoitoon suositellaan ruokavaliota, hoito-ohjelmaa ja lääkehoitoa.
  • Pyelonefriitti. Akuutissa jaksossa esiintyy bakteeri-infektio-oireita: vilunväristykset, pahoinvointi, päänsärky. Tämä on tarttuva tauti.
  • Polysystinen munuaissairaus.

Terveessä kehossa proteiinimolekyylit (ja ne ovat melko suuria) eivät kykene kulkemaan munuaisten suodatusjärjestelmän läpi. Siksi virtsassa oleva proteiini ei saa olla. Tämä indikaattori on sama sekä miehille että naisille. Jos analyysi osoittaa proteinuriaa, on tärkeää kuulla lääkärin selvittää syyt. Asiantuntija arvioi, kuinka korkea proteiinitaso on, onko olemassa samanaikaista patologiaa, miten palauttaa kehon normaali toiminta. Tilastojen mukaan naisella on suurempi urogenitaalisairausriski kuin miehellä.

Menetelmän periaate perustuu proteiinin koaguloitumiseen virtsaan typpioksidin (tai 20-prosenttisen sulfosalisyylihapon) läsnä ollessa.

Työn edistyminen: 5 tippaa virtsaa lisää 1-2 tippaa typpi- (tai sulfosalisyyli) happoa. Proteiinin läsnä ollessa virtsassa esiintyy sameutta.

Pöytä. Virtsan patologisten komponenttien havaitseminen.

Huomautus: tutkitun virtsan glukoosin ja proteiinin läsnä ollessa määritetään niiden kvantitatiivinen sisältö.

Menetelmän periaate: Kun proteiini on vuorovaikutuksessa pyrogallolipunaisen ja natriummolybdaatin kanssa, muodostuu värillinen kompleksi, värin intensiteetti, joka on verrannollinen näytteen proteiinipitoisuuteen.

reagenssit: Työreagenssi - pyrogallolipunainen liuos sukkinaattipuskurissa, kalibrointiproteiiniliuos, jonka pitoisuus on 0,50 g / l

Näytteet sekoitetaan, odota 10 minuuttia. huoneenlämpötilassa (18-25 ° C). Mitataan kokeellisen (Dop) ja kalibrointinäytteen (Dk) optinen tiheys kontrollinäytettä kohti λ = 598 (578-610) nm: ssä. Väritys on stabiili 1 tunti.

laskelma: proteiinin pitoisuus virtsassa (C) g / l lasketaan kaavalla:

jossa: Dop = Dk = C = g / l.

Normaalit arvot: jopa 0,094 g / l (0,141 g / vrk)

Menetelmän periaate: Kun D-glukoosi hapetetaan ilmakehän hapella glukoosioksidaasin vaikutuksesta, muodostuu ekvimolaarinen määrä vetyperoksidia. Peroksidaasin vaikutuksesta vetyperoksidi hapettaa kromogeeniset substraatit (fenolin ja 4-aminoantipiriinin seos - 4ААP) muodostamalla värillinen tuote. Värin intensiteetti on verrannollinen glukoosipitoisuuteen.

Glukoosi + O2 + H2O glukonolaktoni + H2O2

2H2O2 + fenoli + 4AAP värillinen yhdiste + 4H2O

Työn edistyminen: 1 ml työliuosta ja 0,5 ml fosfaattipuskuria lisätään kahteen putkeen. 0,02 ml virtsaa lisätään ensimmäiseen putkeen ja 0,02 ml kalibraattoria lisätään toiseen (kalibrointi, standardi glukoosiliuos, 10 mmol / l). Näytteitä sekoitetaan, inkuboidaan 15 minuutin ajan 37 ° C: n lämpötilassa termostaatissa, ja kokeellisen (Dop) ja kalibrointinäytteiden (Dk) optinen tiheys työreagenssia kohti mitataan aallonpituudella 500-546 nm.

Laskenta: C = Dop / Dk  10 mmol / l Dop = Dk =

Glukoosipitoisuus päivittäisessä virtsassa määritetään mmol / vrk kertomalla saatu määrä virtsan keräyksellä päivässä.

Huom. Kun sokeripitoisuus virtsassa on yli 1%, se on laimennettava.

Tällä hetkellä biokemialliset laboratoriot käyttävät yhtenäistä ekspressiomenetelmää virtsan analysoimiseksi glukoosille käyttäen reaktiivista glukoosikokeen glukoositestiä tai käyttämällä yhdistettyjä testiliuskoja PH: lle, proteiinille, glukoosille, ketonikappaleille ja verelle. Testiliuskat, upotetaan astiaan virtsan kanssa 1 sekunnin ajan. ja vertaa asteikon väriä.

Proteiinin määrittäminen käyttämällä pyrogallolipunaa

Menetelmän periaate perustuu värillisen kompleksin liuoksen optisen tiheyden fotometriseen mittaukseen, joka muodostuu proteiinimolekyylien vuorovaikutuksesta pyrogallolipunaisen värikompleksin ja natriummolybdaattikompleksin (Pyrogallol Red-Molybdate -kompleksin) molekyylien kanssa happamassa väliaineessa. Liuoksen värin intensiteetti on verrannollinen tutkittavan materiaalin proteiinipitoisuuteen. Pesuaineiden läsnäolo reagenssissa antaa samanlaisen määritelmän proteiineista, joilla on erilainen luonne ja rakenne.

Reagenssit. 1) 1,5 mmol / l pyrogallolipunan (PGK) liuos: 60 mg PGK liuotettuna 100 ml: aan metanolia. Säilytä lämpötilassa 0–5 ° C; 2) 50 mmol / l sukkinaattipuskuriliuos, pH 2,5: 5,9 g meripihkahappoa (HOOC-CH2-CH2-COOH); 0,14 g natriumoksalaattia (Na2C204) ja 0,5 g natriumbentsoaattia (C6H5COONa) liuotetaan 900 ml: aan tislattua vettä; 3) 10 mmol / l natriummolybdaattikidehydraattiliuosta (Na2M04O2H2O): 240 mg natriummolybdaattia liuotetaan 100 ml: aan tislattua vettä; 4) Työreagenssi: 900 ml: aan sukkinaattipuskuriliuosta lisätään 40 ml PHC-liuosta ja 4 ml natriummolybdaattiliuosta. Liuoksen pH säädetään arvoon 2,5 suolahapon (HCl) 0,1 mol / l liuoksella ja sen tilavuus säädetään 1 l: ksi. Tässä muodossa oleva reagenssi on käyttövalmis ja se on stabiili, kun sitä säilytetään pimeässä paikassa ja lämpötilassa 2–25 ° C 6 kuukauden ajan; 5) 0,5 g / l standardia albumiiniliuosta.

Määrittelyn kulku. 0,05 ml tutkittua virtsaa lisätään ensimmäiseen koeputkeen, 0,05 ml albumiinistandardiliuosta lisätään toiseen koeputkeen ja 0,05 ml tislattua vettä kolmanteen koeputkeen (kontrollinäyte), sitten 3 ml työreagenssia lisätään näihin koeputkiin. Putkien sisältö sekoitetaan ja 10 minuutin kuluttua näyte ja standardi valokuvataan kontrollinäytettä vastaan ​​aallonpituudella 596 nm kyvetissä, jonka optisen reitin pituus on 10 mm.

Analysoidun virtsanäytteen proteiinipitoisuuden laskeminen suoritetaan seuraavan kaavan mukaisesti:

C = 0,5 × Apr / Ast,

jossa C on proteiinipitoisuus analysoidussa virtsanäytteessä, g / l; Apr ja Ast - tutkitun virtsanäytteen ja standardin albumiiniliuoksen sukupuutto, g / l; 0,5 - standardin albumiiniliuoksen konsentraatio, g / l.

  • liuoksen väri (värikompleksi) on stabiili yhden tunnin ajan;
  • näytteen pitoisuuden ja liuoksen imeytymisen välinen suora suhteellinen suhde riippuu fotometrin tyypistä;
  • kun virtsan proteiinipitoisuus on yli 3 g / l, näyte laimennetaan isotonisella natriumkloridiliuoksella (9 g / l) ja määritys toistetaan. Laimennusaste otetaan huomioon määritettäessä proteiinipitoisuutta.
  • Virtsan proteiinin määrittäminen
  • Unified Sulphosalicylic Acid Trial
  • Yhdistetty Brandberg - Roberts - Stolnikovin menetelmä
  • Määritetään proteiinin määrä virtsassa reaktiolla sulfosalisyylihapon kanssa
  • Biuretin menetelmä
  • Bens - Jones - proteiinin havaitseminen virtsassa

Proteinuria - ilmiö, jossa proteiini havaitaan virtsassa, mikä viittaa munuaisvaurion mahdollisuuteen, on tekijä sydänsairauksien, verisuonten, imusolmukkeiden kehittymisessä.

Proteiinin havaitseminen virtsassa ei aina osoita tautia. Samankaltainen ilmiö on tyypillistä jopa täysin terveille ihmisille, joiden virtsan proteiinia voidaan havaita. Hypotermia, fyysinen rasitus, proteiiniruokien kulutus johtaa proteiinin esiintymiseen virtsassa, joka häviää ilman hoitoa.

Seulonnan aikana proteiineja määrittelee 17% käytännössä terveistä ihmisistä, mutta vain 2% tästä ihmisistä osoittaa positiivisen testituloksen munuaissairauden merkkinä.

Proteiinimolekyylit eivät saa tulla veriin. Ne ovat elimistön kannalta elintärkeitä - ne ovat solujen rakennusaineita, osallistuvat reaktioihin kuten koentsyymit, hormonit, vasta-aineet. Sekä miehillä että naisilla virtsassa on proteiinin täydellinen poissaolo.

Munuaiset suorittavat proteiinimolekyylien häviämisen estämisen elimistössä.

Virtsan suodatukseen osallistuu kaksi munuaisjärjestelmää:

  1. glomerulit - älä anna suuriin molekyyleihin, mutta älä säilytä albumiinia, globuliineja - pieni osa proteiinimolekyyleistä;
  2. munuaisten tubulot - adsorboituneet proteiinit suodatetut glomerulit, palaavat takaisin verenkiertojärjestelmään.

Virtsassa on albumiinia (noin 49%), mukoproteiineja, globuliineja, joista immunoglobuliinien osuus on noin 20%.

Globuliinit - heraproteiinit, joilla on suuri molekyylipaino ja jotka tuotetaan immuunijärjestelmässä ja maksassa. Useimmat niistä syntetisoidaan immuunijärjestelmällä, viittaa immunoglobuliineihin tai vasta-aineisiin.

Albumiinit ovat sellaisten proteiinien fraktio, jotka ensimmäistä kertaa esiintyvät virtsassa jopa pienillä munuaisvaurioilla. Terveessä virtsassa on jonkin verran albumiinia, mutta se on niin vähäistä, ettei sitä voida havaita laboratoriotutkimuksella.

Alempi kynnys, joka voidaan havaita laboratorion diagnostiikalla, on 0,033 g / l. Jos yli 150 mg proteiinia häviää päivässä, he puhuvat proteinuuriasta.

Perustiedot proteiinista virtsassa

Lievä proteiinia sairastava sairaus on oireeton. Visuaalisesti proteiinitonta virtsaa ei voida erottaa virtsasta, jossa on pieni määrä proteiinia. Muutama vaahtoava virtsa on jo runsaasti proteinuuria.

On mahdollista olettaa, että proteiini erittyy virtsaan aktiivisesti potilaan ulkonäöllä vain kohtalaisen tai vakavan taudin asteen seurauksena raajojen, kasvojen, vatsan turvotuksen vuoksi.

Taudin varhaisvaiheissa seuraavat proteiinit voivat olla epäsuoria merkkejä:

  • virtsan värjäytyminen;
  • kasvava heikkous;
  • ruokahaluttomuus;
  • pahoinvointi, oksentelu;
  • luukipu;
  • uneliaisuus, huimaus;
  • kohonnut lämpötila.

Tällaisten merkkien ulkonäköä ei voida jättää huomiotta erityisesti raskauden aikana. Tämä voi merkitä lievää poikkeamaa normistosta, ja se voi olla oireita preeklampsian, preeklampsian kehittymiselle.

Proteiinihävikin kvantitatiivinen arviointi ei ole helppo tehtävä, jotta saadaan kattavampi kuva potilaan tilasta, käytetään useita laboratoriokokeita.

Vaikeuksia valintamenetelmän valinnassa ylimääräisen proteiinin havaitsemiseksi virtsassa selittävät:

  • alhainen proteiinipitoisuus, joka vaatii erittäin tarkkoja tunnustamisvälineitä;
  • virtsan koostumus, mikä vaikeuttaa tehtävää, koska se sisältää aineita, jotka vääristävät tulosta.

Suurin tieto saadaan ensimmäisen aamun virtsan analyysistä, joka kerätään heräämisen jälkeen.

Analyysin aattona seuraavat edellytykset on täytettävä:

  • Älä syö mausteista, paistettua, proteiinia, alkoholia;
  • sulkea diureetti 48 tunnin ajaksi;
  • rajoittaa liikuntaa;
  • noudata huolellisesti henkilökohtaisen hygienian sääntöjä.

Aamu virtsa on informatiivisin, koska se on pitkäaikainen virtsarakossa, vähemmän riippuvainen ruoan saannista.

On mahdollista analysoida virtsan proteiinin määrää satunnaisella osalla, joka otetaan milloin tahansa, mutta tämä analyysi on vähemmän informatiivinen, sitä suurempi on virheen todennäköisyys.

Päivittäisen proteiinihäviön kvantifioimiseksi tehdään virtsan kokonaisanalyysi päivittäin. Tätä varten 24 tunnin kuluessa kerätään erityiseen muoviastiaan kaikki päivälle varattu virtsa. Voit aloittaa keräyksen milloin tahansa. Tärkein edellytys - täsmälleen kokoamispäivä.

Proteiiniarvon kvalitatiivinen määritelmä perustuu proteiinin denaturointiin fysikaalisten tai kemiallisten tekijöiden perusteella. Laadulliset menetelmät liittyvät seulontaan, joka mahdollistaa proteiinin läsnäolon virtsassa, mutta ei anna mahdollisuutta arvioida tarkasti proteinuuria.

Käytetyt näytteet:

  • keittämällä;
  • sulfosalisyylihappo;
  • typpihappo, reagenssi Larionic Heller-rengasnäytteessä.

Näyte, jossa on sulfosalisyylihappoa, suoritetaan vertaamalla vertailun virtsanäytettä kokeneeseen, jossa 7-8 tippaa 20% sulfosalisyylihappoa lisätään virtsaan. Päätelmä proteiinin läsnäolosta tehdään sen mukaan, kuinka voimakkaasti opaalinen pilvisyys esiintyy koeputkessa reaktion aikana.

Yleisemmin käytetty Geller-testi käyttäen 50% typpihappoa. Menetelmän herkkyys on 0,033 g / l. Tässä proteiinikonsentraatiossa koeputkessa, jossa on virtsanäytettä ja reagenssia, 2-3 minuuttia kokeilun alkamisen jälkeen, ilmestyy valkoinen kierre- rengas, jonka muodostuminen osoittaa proteiinin läsnäolon.

Puolikvantitatiiviset menetelmät sisältävät:

  • menetelmä proteiinin määrittämiseksi virtsan testiliuskoissa;
  • Brandberg-Roberts-Stolnikovin menetelmä.

Brandberg-Roberts-Stolnikov-menetelmän mukainen määritysmenetelmä perustuu Geller-rengasmenetelmään, mutta sen avulla voidaan arvioida tarkemmin proteiinin määrä. Kun suoritetaan testi käyttäen tätä tekniikkaa useilla virtsan laimennoksilla, filamenttiproteiinirengas ilmestyy 2–3 minuutin kuluttua testin alusta.

Käytännössä indikaattorina käytetään testiliuskamenetelmää käytetyn väriaineen bromifenoli sinisen kanssa. Testiliuskojen puute on selektiivinen herkkyys albumiinille, mikä johtaa tuloksen vääristymiseen globuliinien tai muiden proteiinien virtsakonsentraation lisääntyessä.

Menetelmän haitat sisältävät myös testin suhteellisen alhaisen herkkyyden proteiinille. Testiliuskat alkavat reagoida proteiinin läsnäoloon virtsassa proteiinipitoisuuden ollessa suurempi kuin 0,15 g / l.

Määrälliset arviointimenetelmät voidaan jakaa ehdollisesti seuraaviin:

Menetelmät perustuvat proteiinien ominaisuuksiin liukenemisen vähentämiseksi sitovan aineen vaikutuksesta huonosti liukoisen yhdisteen muodostumisen kanssa.

Proteiiniin sitoutumista aiheuttavat aineet voivat olla:

  • sulfosalisyylihappo;
  • trikloorietikkahappo;
  • benzetoniumkloridi.

Testituloksista tehdään johtopäätökset, jotka perustuvat näytteen valovirran heikentymisasteeseen suspensiolla verrattuna kontrolliryhmään. Tämän menetelmän tuloksia ei aina voida pitää luotettavina johtuen eroista toteutuksen olosuhteissa: reagenssien sekoitusnopeus, lämpötila, väliaineen happamuus.

Vaikutusta lääkkeiden saannin arviointiin ennen päivää ennen näiden menetelmien suorittamista ei voida tehdä:

  • antibiootit;
  • sulfonamidit;
  • jodia sisältävät lääkkeet.

Menetelmä viittaa käytettävissä olevaan hintaan, jonka avulla sitä voidaan käyttää laajasti seulontaan. Tarkempia tuloksia voidaan kuitenkin saada käyttämällä kalliimpia kolorimetrisiä tekniikoita.

Herkät menetelmät, jotka määrittävät tarkasti proteiinin pitoisuuden virtsassa, sisältävät kolorimetrisiä menetelmiä.

Voit tehdä sen tarkasti:

  • biureettireaktio;
  • tekniikka Lowry;
  • Väritysmenetelmät, joissa käytetään väriaineita, jotka muodostavat komplekseja virtsaproteiinien kanssa, jotka eroavat visuaalisesti näytteestä.

Kolorimetriset menetelmät proteiinin havaitsemiseksi virtsassa

Menetelmä viittaa luotettavaan, erittäin herkkään, jonka avulla voidaan määrittää virtsan albumiinissa, globuliineissa, paraproteiineissa. Sitä käytetään pääasiallisena keinona selventää kiistanalaisia ​​testituloksia sekä päivittäistä virtsan proteiinia potilailla, joilla on sairaaloiden nefrologisia osastoja.

Vielä tarkempia tuloksia voidaan saavuttaa Lowry-menetelmällä, joka perustuu biureettireaktioon sekä Folin-reaktioon, joka tunnistaa tryptofaanin ja tyrosiinin proteiinimolekyyleissä.

Mahdollisten virheiden poistamiseksi virtsanäyte puhdistetaan dialyysillä aminohapoista, virtsahaposta. Salisylaattien, tetrasykliinien, klooripromasiinin avulla on mahdollista tehdä virheitä.

Tarkin menetelmä proteiinin määrittämiseksi perustuu sen omaisuuteen sitoutua väriaineisiin, joita käytetään:

  • Ponceau;
  • Coomassie brilliant blue;
  • pyrogallinen punainen.

Päivän aikana virtsaan erittyvän proteiinin määrä vaihtelee. Jotta voidaan arvioida objektiivisemmin virtsan proteiinihäviö, ota käyttöön päivittäisen proteiinin käsite virtsassa. Tämä arvo mitataan g / vrk.

Virtsan päivittäisen proteiinin nopeaan arviointiin proteiinin ja kreatiniinin määrä määritetään yhdellä virtsan annoksella, sitten proteiini / kreatiniinisuhde lasketaan proteiinihäviön perusteella päivässä.

Menetelmä perustuu siihen, että virtsan kreatiniinin erittymisnopeus on vakio, se ei muutu päivän aikana. Terveessä ihmisessä proteiinin ja kreatiniinin normaali suhde virtsaan on 0,2.

Tämä menetelmä poistaa mahdolliset virheet, joita saattaa ilmetä keräämällä päivittäistä virtsaa.

Laadulliset testit antavat useammin kuin kvantitatiiviset testit vääriä positiivisia tai vääriä negatiivisia tuloksia. Virheitä esiintyy lääkityksen, ruokailutottumusten, fyysisen aktiivisuuden yhteydessä analyysin aattona.

Tämän laadullisen testin dekoodaus annetaan visuaalisesti arvioimalla sameus testiputkessa verrattuna testitulokseen, jossa on:

  1. heikko positiivinen reaktio arvioidaan +;
  2. positiivinen ++;
  3. jyrkästi positiivinen +++.

Geller-rengaskoe arvioi tarkemmin proteiinin läsnäolon virtsassa, mutta ei salli proteiinin kvantifiointia virtsassa. Samoin kuin sulfosalisyylihappotesti, Geller-testi antaa vain karkean käsityksen virtsan proteiinipitoisuudesta.

Menetelmällä voidaan arvioida proteinuurian aste määrällisesti, mutta liian aikaa vievää, epätarkkaa, koska vahvalla laimennuksella arvioinnin tarkkuus pienenee.

Proteiinin laskemiseksi sinun täytyy kertoa virtsan laimennusaste 0, 033 g / l:

Testi ei vaadi erityisolosuhteita, tämä menettely on helppo tehdä kotona. Tätä varten sinun on laskettava testiliuska virtsaan 2 minuutin ajan.

Tulokset ilmaistaan ​​kaistalla olevien plussien lukumäärällä, jonka dekoodaus on taulukossa:

  1. Testitulokset, jotka vastaavat arvoja 30 mg / 100 ml, vastaavat fysiologista proteinuuria.
  2. Testiliuskojen 1+ ja 2 ++ arvot osoittavat merkittävää proteinuuria.
  3. 3 +++, 4 ++++ -arvot on merkitty munuaissairauksien aiheuttamasta patologisesta proteinuuriasta.

Testiliuskat voivat määrittää vain likimääräisen virtsan proteiinin. Tarkkaa diagnoosia varten niitä ei käytetä, ja vielä enemmän, jotta he eivät voi sanoa mitä se tarkoittaa.

Älä anna testiliuskojen arvioida riittävästi proteiinin määrää virtsassa raskaana olevilla naisilla. Luotettavampi arviointimenetelmä on proteiinin määritys päivittäisessä virtsassa.

Virtsan proteiinin määrittäminen käyttäen testiliuskoja:

Virtsan päivittäinen proteiini on tarkempi diagnoosi munuaisten toiminnallisen tilan arvioinnista. Tätä varten sinun on kerättävä kaikki munuaisten kautta erittyvä virtsa päivässä.

Virtsan proteiinipitoisuus löytyy proteiinin ja kreatiniinin suhteesta, tiedot on esitetty taulukossa:

Valkua / kreatiniinisuhdetta koskevat arvot ovat taulukossa olevia tietoja:

Kun menetetään yli 3,5 g proteiinia päivässä, sitä kutsutaan massiiviseksi proteinuriaksi.

Jos virtsassa on paljon proteiinia, tarvitaan uudelleenarviointi 1 kuukauden kuluttua, sitten 3 kuukauden kuluttua tulosten mukaan, mikä osoittaa, miksi normi ylittyy.

Virtsan lisääntyneen proteiinin syyt ovat sen lisääntynyt tuotanto kehossa ja munuaisten vajaatoiminnan heikentyminen.

  • fysiologiset - pienet poikkeamat normista johtuvat fysiologisista prosesseista, jotka ratkaistaan ​​spontaanisti;
  • patologiset muutokset johtuvat munuaisten tai muiden elinten elimistön patologisesta prosessista ilman hoitoa etenee.

Vähäistä proteiinin lisääntymistä voidaan havaita runsaalla proteiinipitoisuudella, mekaanisilla palovammoilla, vammoilla, joihin liittyy lisääntynyt immunoglobuliinien tuotanto.

Lievä proteinuria voi johtua fyysisestä rasituksesta, psyko-emotionaalisesta stressistä tai tiettyjen lääkkeiden ottamisesta.

Fysiologinen proteinuuria on virtsan proteiinin lisääntyminen lapsilla syntymän jälkeisinä päivinä. Mutta elämän viikon jälkeen lapsen virtsan proteiinipitoisuutta pidetään poikkeamana normista ja se osoittaa kehittyvän patologian.

Munuaissairauksiin, tartuntataudeihin liittyy myös joskus proteiinin esiintymistä virtsassa.

Tällaiset tilat vastaavat tavallisesti lievää proteinuuria, ovat ohimeneviä ilmiöitä, jotka kulkevat nopeasti omasta, ilman erikoiskäsittelyä.

Vakavampi sairaus, vakava proteinuuria havaitaan seuraavissa tapauksissa:

  • munuaiskerästulehdus;
  • diabetes;
  • sydänsairaus;
  • virtsarakon syöpä;
  • multippeli myelooma;
  • infektio, huumeiden vaurioituminen, polysystinen munuaissairaus;
  • korkea verenpaine;
  • systeeminen lupus erythematosus;
  • Goodpasture-oireyhtymä.

Suolen tukkeutuminen, sydämen vajaatoiminta ja hypertroidia voivat aiheuttaa proteiinijäämiä virtsassa.

Proteuriaurian lajikkeet luokitellaan useilla tavoilla. Proteiinien laadullista arviointia varten voidaan käyttää Yaroshevsky-luokitusta.

Vuonna 1971 luotu systematiikka Yaroshevsky erottaa proteinuuria:

  1. munuaisten - joka sisältää glomerulaarisen suodatuksen rikkomisen, tubulojen proteiinin vapautumisen, proteiinien uudelleen adsorboitumisen putkissa;
  2. prerenal - esiintyy munuaisten ulkopuolella, hemoglobiinin erittyminen, proteiinit, jotka esiintyvät veressä ylimääräisenä myelooman seurauksena;
  3. Postrenal - esiintyy virtsateiden kohdalla munuaisten jälkeen, proteiinin erittyminen virtsarakon tuhoutumiseen.

Kvantitatiivista arviointia siitä, mitä tapahtuu, ehdollisesti proteiiniarvoja eristetään. On muistettava, että ne voivat helposti siirtyä raskaampaan ilman hoitoa.

Proteinurian vakavin vaihe kehittyy yli 3 g: n proteiinin häviämisen päivässä. Proteiinin häviäminen 30 mg: sta 300 mg: aan päivässä vastaa kohtalaista vaihetta tai mikroalbumuriaa. Jopa 30 mg proteiinia päivittäisessä virtsassa tarkoittaa lievää proteiinia.

Proteiinien normi virtsassa kuinka paljon?

    Normaali proteiini virtsassa on käytännössä poissa (alle 0,002 g / l). Joissakin olosuhteissa pieni määrä proteiinia voi kuitenkin esiintyä virtsassa terveillä yksilöillä, kun niillä on suuri määrä proteiiniruokaa, mikä johtuu jäähdytyksestä, jossa on emotionaalinen stressi, pitkäaikainen fyysinen rasitus (ns. Marssiva proteinuuria).

Merkittävä määrä proteiinia virtsassa (proteinuria) on patologia. Proteusianuria voi aiheuttaa munuaissairaus (akuutti ja krooninen glomerulonefriitti, pyelonefriitti, raskaana oleva nefropatia jne.) Tai virtsateiden (virtsarakon tulehdus, eturauhasen, virtsaputkien). Munuaisten proteinuuria voi olla orgaaninen (glomerulaarinen, tubulaarinen ja ylimääräinen) ja toimiva (kuumeinen proteinuuria, ortostaattinen nuorilla, imeväisten yliruokinnassa vastasyntyneissä). Funktionaalinen proteinuuria ei liity munuaispatologiaan. Proteiinin päivittäinen määrä vaihtelee potilailla, jotka ovat 0,1 - 3,0 g tai enemmän. Virtsan proteiinien koostumus määritetään elektroforeesilla. Bens-Jones-proteiinin esiintyminen virtsassa on ominaista myelooma ja Waldenstrom macroglobulinemia, # 223; 2 mikroglobuliineja, jos munuaistubulus on vahingoittunut.

  • Normaali proteiini virtsassa on käytännössä poissa (alle 0,002 g / l).
  • Virtsan tutkimuksessa havaitut tärkeimmät taudin oireet.

    SG-paino. Ominaispainon lasku osoittaa, että munuaiset kykenevät keskittymään virtsaan ja poistamaan toksiinit elimistöstä, mikä tapahtuu munuaisten vajaatoiminnan tapauksessa. Spesifisen painon nousu liittyy suureen määrään sokeria virtsassa, suolat. On huomattava, että vain yhden virtsatestin ominaispainoa ei voida arvioida, satunnaisia ​​muutoksia voi esiintyä, virtsan analyysi on tarpeen toistaa 1-2 kertaa.

    Proteiiniproteiini virtsassa - proteinuuria. Proteusianuria voi aiheuttaa munuaisten vahingoittuminen nefriitissä, amyloidoosissa ja myrkkyjen vaurioitumisessa. Virtsan proteiini voi esiintyä myös virtsateiden sairauksien (pyelonefriitti, kystiitti, prostatiitti) vuoksi.

    Glukoosi glukoosi (sokeri) virtsassa - glykosuria - useimmiten diabeteksen takia. Harvinaisempi syy on munuaistubulusten häviäminen. On hyvin häiritsevää, jos ketonirungot havaitaan yhdessä sokerin kanssa virtsassa. Tämä tapahtuu vakavan, väärin kohdennetun diabeteksen vuoksi ja on diabeteksen vakavimpien komplikaatioiden - diabeettisen kooman - merkki.

    Bilirubiini, Urobilinogeeni Bilirubiini ja urobiliini määritetään virtsassa eri keltaisuusmuodoissa.

    Erytrosyytit Erytrosyytit virtsassa - hematuria. Tämä tapahtuu joko munuaisten itsensä tappamisen, useimmiten tulehduksen yhteydessä tai potilailla, joilla on virtsateiden sairauksia. Jos esimerkiksi kivi liikkuu niiden varrella, se voi vahingoittaa limakalvoa, virtsassa on punaisia ​​verisoluja. Heikentynyt munuaiskasvain voi myös johtaa hematuriaan.

    Leukosyytit Leukosyytit virtsassa - leukosyturia, useimmiten tulehduksellisista muutoksista virtsateissä potilailla, joilla on pyelonefriitti, kystiitti. Leukosyytit määräytyvät usein naispuolisten ulkoisten sukuelinten, miesten, eturauhanen tulehduksen perusteella.

    Sylinterit Sylinterit ovat erikoisia mikroskooppisia rakenteita. Hyaliinisylinterit, joiden määrä on 1-2, voivat olla terveessä ihmisessä. Ne muodostuvat munuaistubulusissa, se on juuttunut yhteen proteiinihiukkasia. Mutta niiden lukumäärän lisääntyminen, muiden tyyppisten sylinterien (rakeisten, punasolujen, rasvojen) määrä osoittaa aina munuaisen kudoksen vahingoittumisen. Munuaisten tulehdussairauksissa on sylintereitä, metabolisia vaurioita, kuten diabetes.

    Informatiivinen menetelmä ja sen rajat. Yleisen virtsanalyysin informaatiosisältö munuaisten erityisten sairauksien havaitsemiseksi on alhainen, yleensä tarvitaan lisää tarkempia tutkimuksia. Tutkimukset ovat kuitenkin hyvin tärkeitä, etenkin kun tehdään ennaltaehkäiseviä tutkimuksia, sillä se mahdollistaa munuaissairauden varhaisen merkin tunnistamisen. Tiedetään myös, että usein munuaissairaus esiintyy piilossa, ja vain virtsan tutkimus antaa heille mahdollisuuden epäillä ja suorittaa tarvittavaa lisätutkimusta.

    Useimmissa laboratorioissa tutkittaessa proteiinia virtsaa käytetään ensin laadullisia reaktioita, jotka eivät havaitse proteiinia terveelle henkilölle. Jos virtsassa oleva proteiini havaitaan kvalitatiivisilla reaktioilla, kvantitatiivinen (tai puolikvantitatiivinen) määritys suoritetaan. Samalla on tärkeää käyttää käytettyjen menetelmien ominaisuuksia, jotka kattavat eri uroproteiinispektrin. Täten proteiinin määrittämisessä käyttäen 3-prosenttista sulfosalisyylihappoa, proteiinin määrää pidetään normaalina 0,03 g / l asti, kun taas pyrogallolimenetelmää käytettäessä normaaliproteiiniarvojen raja nousee arvoon 0,1 g / l. Tältä osin on analyysilomakkeessa tarpeen ilmoittaa proteiinin normaaliarvo laboratorion käyttämälle menetelmälle.

    Kun määritetään proteiinin vähimmäismäärät, on suositeltavaa toistaa analyysi, mikäli epäselvissä tapauksissa on määritettävä virtsan proteiinin häviäminen päivittäin. Normaali päivittäinen virtsa sisältää pieniä määriä proteiinia. Fysiologisissa olosuhteissa suodatettu proteiini imeytyy lähes täydellisesti proksimaalisten putkien epiteeliin ja sen pitoisuus virtsan päivittäisessä määrässä vaihtelee eri tekijöiden mukaan jälkeistä 20 50, 80 100 mg: iin ja jopa 150 - 200 mg: aan. Jotkut tekijät uskovat, että proteiinin päivittäinen erittyminen 30 50 mg / vrk on aikuisen fysiologinen normi. Toiset uskovat, että virtsan proteiinien erittyminen ei saa ylittää 60 mg / m2 kehon pinta-alaa päivässä lukuun ottamatta ensimmäistä elinvuotta, kun fysiologisen proteinuuria-arvon arvo voi olla neljä kertaa suurempi kuin määritelty arvo.

    Yleinen edellytys proteiinien esiintymiselle terveen ihmisen virtsaan on niiden melko korkea pitoisuus veressä ja molekyylipaino enintään 100 200 kDa.

  • tämä ei ole normi, sillä diagnoosi on mahdollista, toinen asia on se, että nefroottisen oireyhtymän kohdalla se on todella pieni indikaattori.. katso klinikka - turvotus, paine jne., jatkaa määrättyä hoitoa.
  • ja silti sanon: se on OK EI ole!
  • Virtsa verellä naisilla: syyt ja hoito

    Missä on miesten eturauhasen järjestelmä